Саузерн-блоти все ще використовуються?

САУЗЕРН-БЛОТ У 1975 році Едвін М. Саузерн розробив Саузерн-блот. Це був перший інструмент молекулярної біології, який мав великий вплив на клінічну молекулярну патологію. Оскільки це відносно трудомісткий і тривалий аналіз, його використання в клінічній молекулярній лабораторії сьогодні обмежене.

Зараз переважно замінені альтернативними технологіямиСаузерн-блоттинг — це метод визначення розміру фрагментів ДНК, які виявляються за допомогою комплементарного ДНК-зонду.

У пацієнта з серповидно-клітинною анемією фермент не розрізає ДНК, тому спостерігається лише один фрагмент ДНК. Сьогодні Саузерн-блотінг значною мірою замінений на ПЛР в реальному часі щоб відповісти на ті самі експериментальні запитання.

Методи, альтернативні Саузерн-блотінгу, включають мікрочипи, NGS та кількісна ПЛР у реальному часі (qPCR). КПЦР заснована на ампліфікації специфічних послідовностей ДНК за допомогою ПЛР. Він вимірює накопичення ампліфікованої ДНК у режимі реального часу, дозволяючи кількісно визначити початкову кількість цільової ДНК.

Загалом, майбутнє вестерн-блоттингу залежить не лише від технічного прогресу, але й від чесності та компетентності лабораторного персоналу, вчених і виробників антитіл. Через сорок років після першої публікації вестерн-блоттинг зовсім не застарів.

Істерн-блот – це неіснуюча біохімічна методика. Містер Саузерн винайшов Саузерн-блот для виявлення ДНК різного розміру. Пізніше Нозерн-блот використовувався для подібного методу за участю РНК, а Вестерн-блот — для білка, але Істерн-блоту немає, т.к. четвертої молекули в наборі ДНК/РНК/білка немає.

Можна використовувати Саузерн-блот аналіз щоб дослідити, чи ген ампліфікований, видалений або структурно перебудований у ракових клітинах порівняно з нормальними клітинами. Хоча ця методика досить трудомістка, вона особливо корисна для виявлення великих делецій у геномах пухлин.